小鼠骨形态发生蛋白9 ELISA检测试剂盒
产品名称： 小鼠骨形态发生蛋白9 ELISA检测试剂盒
英文名称： Mouse BMP-9 ELISA KIT
产品编号： SEKM-0056
产品价格： 0
产品产地： 北京
品牌商标： solarbio
更新时间： 2025-01-03T10:07:38
使用范围： null
北京索莱宝科技有限公司
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Mouse BMP-9 ELISA KIT
品牌：Solarbio | 货号：SEKM-0056
8 pg/ml（灵敏度），检测范围：15.6 - 1,000 pg/ml
| 中文名称 | 小鼠骨形态发生蛋白9检测试剂盒 |
|---|---|
| 英文名称 | Mouse BMP-9 ELISA KIT |
| 反应性 | Mouse |
| 样品类型 | Serum, plasma, Cell culture supernatant |
| 灵敏度 | 8 pg/ml |
| 检测目标 | BMP-9 |
| 应用 | Sandwich ELISA |
骨形态发生蛋白（BMP）构成转化生长因子β（TGF-β）超家族的一个亚群。顾名思义，骨形成蛋白最 初被确定为软骨和骨形成的调节器。它们在各种组织和器官的胚胎发生和形态发生过程中起着重要作用， 并且可以调节多种细胞类型的生长、分化、趋化和凋亡。 骨形成蛋白-9（bone morphogenetic protein-9,BMP-9）又名生长分化因子-2(growth differentiation factor 2,GDF-2)，是骨形成蛋白家族（BMPs）的主要成员之一，是由 429 个氨基酸组成的前体蛋白，通过丝氨酸 蛋白酶的内切作用，得到成熟有活性的短二聚体(25 k Da)。BMP-9 由非实质性肝细胞（肝星状细胞、库普 弗细胞等）分泌，其与活化素受体样激酶-1 及非实质肝细胞内的内皮糖蛋白具有较高的亲和力。BMP-9 主 要在肝脏中高表达，同时也在大脑、肺、骨骼肌等组织中有少量的表达。多项研究表明，BMP-9 具有促进 造血、成骨、成软骨及诱导肝细胞增殖的作用，同时还有调节血糖稳态以及中枢神经系统胆碱能神经元分 化等功能。
检测原理：
Solarbio (Solarbio ®) ELISA 试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗小鼠 BMP-9 单克隆抗体包被在酶标板上；分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本,标准品和样本中的小鼠 BMP-9 会 与酶标板上的包被抗体充分结合；洗板后加入生物素化抗小鼠 BMP-9 抗体,该抗体会与板子上包被抗体捕获 的标准品和样本中的小鼠 BMP-9 发生特异性结合；洗板后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素, 生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合；洗板后加入显色剂底物 TMB,若反应孔中样品存在不同浓 度的小鼠 BMP-9,则 HRP 会使无色 TMB 变成不同深浅（正相关）的蓝色物质,加入终止液后反应孔会变成黄 色；最后,在λmax=450 nm（OD=450 nm）处测定反应孔样品吸光度（OD）,样本中的小鼠浓度与 OD 成正比, 通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中小鼠的浓度。
注意事项：
1. 试剂盒应在有效期内使用,请不要使用过期的试剂。
2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱,已复溶但未用完的标准品,请丢弃。
3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30 min,且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。
4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测,且加入试剂的顺序应保持一致。
5. 为避免交叉污染,请在试验中使用 1 次性试管,枪头,封板膜（※）及洁净塑料容器。.
6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少,在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶 7. 盖上,使用前请离心处理（5-10 S 即可）,使管壁上的液体集中在管底部,取用时,请用移液器小心吹打几次。
8. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外,请不要使用其他来源试剂盒内含的试剂代替本试剂盒 中的某单个组分。
9. 为保证结果准确,每次检测均需做标准曲线。
安全提示：
试剂盒中的终止液为酸性溶液,操作小鼠员在使用时请带上手套并注意防护；在操作过程中也要避免试 剂接触皮肤和眼睛,如果不慎接触,请用大量清水清洗；检测血液样本及其它体液样本时,请按国家生物实验室 安全防护有关管理规定执行。
自备实验器材（不提供,可代购）
1． 酶标仪（主波长 450nm,参考波长 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板机或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 双蒸水,去离子水,量筒等
6． 稀释用聚丙烯试管
样本收集及储存：
1. 细胞培养上清： 将细胞培养基移至无菌离心管,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于 -20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存）,避免反复冻融。
2. 血清样本：室温血液自然凝固20 min后,在4℃条件下1000×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃ 下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存）,保存过程中如有沉淀,请再次离心,避免反复冻融。
3. 血浆样本： 将全血收集到含抗血凝剂的管中,根据标本的实际要求选择 EDTA,柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合 20 min,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检 测可放入 2-8℃储存）,避免反复冻融。
※注意：
血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本,以免影响检测结果；如果样本中的靶标物检测浓度高于 标准品的最高值,请将样品做适当倍数稀释后检测,建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。
试剂准备：
1. 试剂回温：首先在实验前 30 min 将试剂盒,待测样本放置于室温下,浓缩洗涤液如出现结晶,请放入 37℃ 温浴直到结晶全部溶解。
2. 配制洗涤液：预先计算好稀释后的洗涤液使用体积,然后用双蒸水或去离子水将 20 倍浓缩洗涤液稀释成 1 倍应用液,未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。
3. 标准品梯度稀释：加入标准品/样本稀释液（SR1）1000ul 至冻干标准品中,静置15分钟待其完全溶解后 轻轻混匀(浓度为2000pg/ml),按照以下浓度进行2倍稀释：500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125pg/ml 进行稀释。500pg/ml作为标准曲线的最高点浓度,标准品/样本稀释液（SR1）作为标准曲线的零点 （0pg/ml）。复溶过的标准品原液（2000pg/ml）未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装,并将其 贮存在-20～-80℃冰箱,具体如下图。
4. 生物素化抗体工作液：预先计算好试验所需用量,用检测稀释液（SR2）将100倍抗体浓缩液稀释成1倍应 用工作液（稀释前充分混匀）,请在30分钟内加入到反应孔中。
5. 酶结合物工作液：按每次试验所需用量配制,用酶结合物稀释液（SR3）将100倍浓缩酶结合物稀释成1 倍应用工作液（稀释前离心）,请在30分钟内使用。
6. 洗涤方法：
自动洗板：甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,注入洗涤液为 300ul/孔,注
与吸出间隔为 30 秒,洗板 5 次。
手工洗板：甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,用洗瓶加入洗涤液 300ul/孔,静止 30 秒
后甩净酶标板孔中液体,在厚迭的吸水纸上拍干,洗板 5 次。
结果判断：
1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测,参考波长为 630 nm。如不能进行双波长检测,请用 450 nm 的 OD 测定值减去 630 nm 的 OD 测定值。
2.计算标准品、样品的平均 OD 值：每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值
3.以标准品浓度为横坐标,吸光度OD值为纵坐标,用软件绘制标准曲线,样品中含量可通过对应OD值由标准曲 线换算出相应的浓度。
4.若标本 OD 值高于标准曲线上限,应做适当稀释后重新检测,计算浓度时再乘以稀释倍数。
2. 灵敏度：
最低可检测小鼠浓度达 4pg/ml. 20 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两个标准差,计算相应的可检测浓度。
3. 特异性：
不与人的 BMP-2、 BMP-3、 BMP-3b、 BMP-4 、BMP-5 、BMP-6 、BMP-8b、TGF-α、TGF-β1 小鼠 的 BMP-3b、BMPR-1A、BMPR-1B 等反应.
4. 重复性：
板内,板间变异系数<10%。
5. 回收率：
在选取的健康小鼠血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的小鼠 ,计算回收率。
6. 线性稀释： 分别在选取的 4 份健康小鼠血浆和细胞培养上清中加入高浓度小鼠 ,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评 估线性。
结果判断：
1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测,参考波长为 630 nm。如不能进行双波长检测,请用 450 nm 的 OD 测定值减去 630 nm 的 OD 测定值。
2.计算标准品、样品的平均 OD 值：每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值
3.以标准品浓度为横坐标,吸光度OD值为纵坐标,用软件绘制标准曲线,样品中含量可通过对应OD值由标准曲 线换算出相应的浓度。
4.若标本 OD 值高于标准曲线上限,应做适当稀释后重新检测,计算浓度时再乘以稀释倍数。
2. 灵敏度：
最低可检测小鼠浓度达 4pg/ml. 20 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两个标准差,计算相应的可检测浓度。
3. 特异性：
不与人的 BMP-2、 BMP-3、 BMP-3b、 BMP-4 、BMP-5 、BMP-6 、BMP-8b、TGF-α、TGF-β1 小鼠 的 BMP-3b、BMPR-1A、BMPR-1B 等反应.
4. 重复性：
板内,板间变异系数<10%。
5. 回收率：
在选取的健康小鼠血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的小鼠 ,计算回收率。
6. 线性稀释： 分别在选取的 4 份健康小鼠血浆和细胞培养上清中加入高浓度小鼠 ,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评 估线性。
